質量檢測:
1)紫外吸收法測定
先用稀(xi)釋用的TE溶液將分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計調零。然后(hou)取少量(liang)RNA溶液用TE稀(xi)釋(1:100)后(hou),讀取其在分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計260nm和280nm處(chu)的吸(xi)收(shou)值,測定RNA溶液 濃度和純(chun)度。
濃度測定
A260下(xia)讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀(xi)釋(shi)倍數× 40 g/ml。具體計算如下(xia):
RNA溶于40 l DEPC水(shui)中(zhong),取5ul,1:100稀釋至495的TE中(zhong),測(ce)得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
取5ul用來測量以后,剩余樣品RNA為35 l,剩余RNA總量為:
35 l × 0.84 gl = 29.4 g
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比(bi)(bi)值即為(wei)RNA純度,比(bi)(bi)值范圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①制膠
1g瓊脂糖(tang)溶于(yu)72ml水(shui)中,冷卻至(zhi)60℃,10 ml的(de)(de)10× MOPS電泳(yong)緩(huan)沖(chong)液(ye)和18 ml的(de)(de)37% 甲醛溶液(ye)(12.3 M)。
10×MOPS電(dian)泳緩沖液
濃度 成分
0.4M MOPS,pH 7.0
0.1M 乙酸鈉
0.01M EDTA
灌制凝膠(jiao)板(ban),預留加樣(yang)孔至(zhi)少可以加入25 l溶液(ye)。膠(jiao)凝后(hou)取下梳子,將凝膠(jiao)板(ban)放入電(dian)泳(yong)槽內(nei),加足量的1×MOPS電(dian)泳(yong)緩沖(chong)液(ye)至(zhi)覆蓋膠(jiao)面幾個(ge)毫米。